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i-GONAD: improved genome-editing via oviductal nucleic acids delivery
i-GONAD:一种改进的经输卵管活体电转进行胚胎基因编辑的新技术
主讲人:Dr. Makoto Matsuyama, Shigei Medical Research Institute, Japan
仪器支持:NEPA21 高效基因电转系统
承办单位:华粤行仪器有限公司&NEPA GENE
时间、地点:4月1日(北京),4月3日(广州)
联系方式:18001171636;020-34821111 ext. 8245;cell@huayueco.com
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仪器支持:NEPA21 高效基因电转系统
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Dr. Makoto Matsuyama
松山博士是石井医学研究所PI,分子遗传学部门Division Head。他在国家基础生物学研究所获得博士学位,先后在发展生物学中心(CDB)和爱知(Aichi )癌症研究中心工作。他的科学目标是利用遗传方法了解肾脏发育和病理学。他率先用NEPA21电转仪建立了i-GONAD法,成功地以相对较高的效率(eg. 敲除等位基因的效率约97%)生成了基因组编辑的小鼠;并应用于大鼠(rGONAD),建立了Sprague-Dawley、 Lewis、 F1杂交(Sprague-Dawley和Brown-Norway)不同品系的KO\KI大鼠。i-GONAD技术将有望广泛用于其他哺乳动物的基因组编辑,为动物基因组编辑研究提供了新的思路和更简单、易行且高效的方法。
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rGONAD: Anewsimple in-vivo methodforgenome-editingin rats (KO\KI)
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受精卵显微注射法或体外电穿孔法,是目前较常用的胚胎基因编辑获得KO/KI动物的方法。然而,这些技术需要费时费力的体外处理,包括受精卵分离、基因导入、体外培养、胚胎移植到代孕雌鼠等繁琐复杂流程。Dr. Makoto Matsuyama实验室开发了一种简单高效的体内电转方法,称为i-GONAD,改进的基因组编辑,通过输卵管核酸输送,不需要上述体外处理。目前i-GONAD法成功进行小鼠、大鼠基因组编辑,也有望应用于其他哺乳动物,如豚鼠、仓鼠、牛、猪、猴等。
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Successful production of genome-edited rats by therGONAD method
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Day1
1.从孕鼠分离受精卵(显微操作)
2.体外受精卵显微注射或体外电转
3.体外培养受精卵至2细胞期
4.雌鼠与输精管结扎的雄鼠合笼交配
Day2
5.检查获得假孕雌鼠
6.将培养的胚胎移植到假孕雌鼠
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1.注射:将cas9蛋白和gRNA\ssDNA注射入孕鼠输卵管
2.电转: NEPA21进行活体输卵管电转
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★ 十几分钟即可完成,不需体外操作、培养、移植
★ 不需要代孕雌鼠及输精管结扎雄鼠
★ 孕鼠可重复使用,减少动物消耗
★ 不依赖熟练的胚胎操作人员
★ 适用于knock-out 和 knock-in
★ 更符合伦理学3Rs (Reduction, Replacement, and Refinement)要求
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http://www.nepagene.jp/e_publications01.html#Embryos in oviduct
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