|
|
|
|
|
i-GONAD： improved genome-editing via oviductal nucleic acids delivery
i-GONAD：一种改进的经输卵管活体电转进行胚胎基因编辑的新技术
主讲人：Dr. Makoto Matsuyama, Shigei Medical Research Institute, Japan
仪器支持：NEPA21 高效基因电转系统
承办单位：华粤行仪器有限公司&NEPA GENE
时间、地点：4月1日（北京），4月3日（广州）
联系方式：18001171636；020-34821111 ext. 8245；cell@huayueco.com
|
仪器支持：NEPA21 高效基因电转系统
|
|
 |
|
|
|
|
Dr. Makoto Matsuyama
松山博士是石井医学研究所PI，分子遗传学部门Division Head。他在国家基础生物学研究所获得博士学位，先后在发展生物学中心（CDB）和爱知（Aichi ）癌症研究中心工作。他的科学目标是利用遗传方法了解肾脏发育和病理学。他率先用NEPA21电转仪建立了i-GONAD法，成功地以相对较高的效率（eg. 敲除等位基因的效率约97%）生成了基因组编辑的小鼠；并应用于大鼠(rGONAD)，建立了Sprague-Dawley、 Lewis、 F1杂交（Sprague-Dawley和Brown-Norway）不同品系的KO\KI大鼠。i-GONAD技术将有望广泛用于其他哺乳动物的基因组编辑，为动物基因组编辑研究提供了新的思路和更简单、易行且高效的方法。
|
|
|
|
|
|
|
rGONAD: Anewsimple in-vivo methodforgenome-editingin rats (KO\KI)
|
|
受精卵显微注射法或体外电穿孔法，是目前较常用的胚胎基因编辑获得KO/KI动物的方法。然而，这些技术需要费时费力的体外处理，包括受精卵分离、基因导入、体外培养、胚胎移植到代孕雌鼠等繁琐复杂流程。Dr. Makoto Matsuyama实验室开发了一种简单高效的体内电转方法，称为i-GONAD，改进的基因组编辑，通过输卵管核酸输送，不需要上述体外处理。目前i-GONAD法成功进行小鼠、大鼠基因组编辑，也有望应用于其他哺乳动物，如豚鼠、仓鼠、牛、猪、猴等。
|
|
扫二维码，查阅文献
Successful production of genome-edited rats by therGONAD method
|
|
|
|
|
|
|
Day1
1.从孕鼠分离受精卵(显微操作)
2.体外受精卵显微注射或体外电转
3.体外培养受精卵至2细胞期
4.雌鼠与输精管结扎的雄鼠合笼交配
Day2
5.检查获得假孕雌鼠
6.将培养的胚胎移植到假孕雌鼠
|
|
|
|
|
|
1.注射：将cas9蛋白和gRNA\ssDNA注射入孕鼠输卵管
2.电转： NEPA21进行活体输卵管电转
|
|
|
|
★ 十几分钟即可完成，不需体外操作、培养、移植
★ 不需要代孕雌鼠及输精管结扎雄鼠
★ 孕鼠可重复使用，减少动物消耗
★ 不依赖熟练的胚胎操作人员
★ 适用于knock-out 和 knock-in
★ 更符合伦理学3Rs (Reduction, Replacement, and Refinement)要求
|
|
|
|
|
|
|
http://www.nepagene.jp/e_publications01.html#Embryos in oviduct
|
|
|
 |
 |
